您好!欢迎登录北京酷来搏科技有限公司官方网站!

产品分类

中文名:酵母阳性克隆检测试剂盒(杂交筛库)

英文名:Positive clone assay

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

说明书下载点击下载 >>

产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2420-20T20T198198
SK2420-200T200T698698
产品简介

保存条件:-20℃储存,有效期1年。

包装内容:

11.png

产品说明:

本产品用于酵母单杂双杂筛库系统,可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。

PCR Mix 含Taq、dNTP、PCR buffer和水,只需要补充模板5μL,引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。

3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。

本试剂盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外(可供200T),还免费提供菌液裂解液II用于菌液PCR(可供20T)。

使用方法:

菌落样品

1.吸取5 μL的菌落裂解液I加入到PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

2.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1~2 mm的酵母菌落悬浮在装有菌落裂解液I的PCR管中。

3.搅拌(吹打)或者震荡混匀后,静置5 min,即为裂解产物。

4.(可选步骤:于-20℃冷冻 5 min 或置于-80℃冰箱速冻10 s。)

5.准备PCR预混液:

11.png

6.在5 μL的裂解产物中加入45 μL PCR预混液(已加引物),直接进行PCR扩增。

注意:1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。

      2. 培养时间短的样品,无需冷冻处理。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液,解冻与否均可。

      3. 团状酵母菌落很难裂解,搅拌或者震荡混匀尤为重要。 

菌液样品

1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

2. 在含有菌液裂解液II的PCR管中加入等体积的酵母菌液。

3. 搅拌或者震荡混匀。

4. 冷冻处理:于-20℃冷冻3 min 或置于-80℃冰箱速冻10 s后,PCR仪95℃保温2 min。

5. 12,000 rmp离心2 min,取上清裂解产物,用于PCR扩增。

PCR反应体系:

11.png


PCR反应条件:

11.png

注意事项:

1. 菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。

2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。

3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后,用酵母质粒快速提取试剂盒II型(PE052)提取(约需30 min)后再进行PCR扩增。

我的购物车 (0)

京ICP备13050818号-1