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产品分类

中文名:Super酵母转化试剂盒II(酿酒酵母专用)

英文名:Super Yeast Transformation Kit II

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

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产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2402-200T200T15981598
产品简介

储存条件: -20℃保存,有效期2年。Y3 避免多次冻融;Y1、Y2溶液 4℃可长期 保存。

产品内容:

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产品说明:

Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒(SK2401)可以完成酵母感受态制备,酵母感受态冻存,酵母转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态,-80℃冰箱可冻存一年,后续酵母转化实验无需重新制备感受态,操作简单而快速,该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus(SK2402)或单独购买YPD Plus Liquid Medium(YT0004),转化产物用YPD Plus复苏,其转化效率可以增加50-100%。

使用方法:

(一)酵母感受态细胞的制备:

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线,30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,30℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落长至2 mm长时,首先把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30-50mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1,000 g,离心5 min, 去上清。

注意:4℃保存一周之内的酵母菌培养产物,可用3mL接种50mL YPDA培养基过夜培养后,离心收集细胞,用于下游实验。此步可以节约菌种活化、小摇所需时间。

5.用10 mL的Y1溶液 悬浮、洗涤沉淀,1,000 g,离心5 min,去上清。

6.沉淀中加入0.5-1 mL Y2溶液悬浮,即感受态细胞。按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管(可用于转化)。

7.  将感受态缓慢冷冻后置于-80℃冰箱保存。建议将感受态细胞放入程序降温盒,或者用多层纸包好放入泡沫盒中,再放于-80℃冰箱过夜,后将感受态取出置于-80℃保存。保存一年基本不影响其转化效率。使用时,-80℃冰箱取出,室温融化后用于转化。

  注意:缓慢冻存感受态,是保证冻存后的感受态细胞转化效率的关键步骤。

(二)酵母质粒转化:

1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μL预混液。

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2.吸取360 μL预混液加入感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮在预混液中。

3.放置在30 ℃的水浴锅中热激60 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

4.3000 g 离心3 min,弃上清。

5. (可选步骤): 用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮,30℃摇床震荡培养30-60 min。

6.3000 g 离心3 min,弃上清。

7.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体。

8.将重悬的菌体涂到相应的酵母筛选培养基平板上,30℃培养2-4天。

(三)酵母文库转化:

1. 配制预混液,用于文库转化(需用15-50mL的离心管)。

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2.将上述预混液加入到600 uL 感受态细胞沉淀中,震荡使感受态细胞充分重悬。

3.放置在30 ℃的水浴锅中热激90 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

4.3000 g 离心3 min,弃上清。

5.(可选步骤: 用3 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮,30℃摇床震荡培养90 min。)

6.3000 g 离心3 min,弃上清。

7.加入15 mL 无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体。

8.将重悬的菌体涂到相应的酵母筛选培养基平板上,30℃培养2-4天。

注意事项:

1.  转化全程要求无菌操作。

2.  为了保证转化效率,感受态不宜直接用液氮冻存。

3.  增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。

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