您好!欢迎登录北京酷来搏科技有限公司官方网站!

产品分类

中文名:酵母阳性克隆快速检测试剂盒

英文名:Positive clone assay

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

说明书下载点击下载 >>

产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2420-20T20T198198
SK2420-200T200T698698
产品简介

    使用本试剂盒能够快速提取的酵母质粒,大幅减少酵母阳性克隆的鉴定时间。仅适用于通过PCR扩增的方法鉴定酵母阳性克隆或获得的PCR产物用于测序分析。如想获得纯度高酵母质粒请选用酵母质粒提取试剂盒(SK2410)。

使用方法:

一、酵母质粒提取

   1.吸取20 μL的酵母质粒快速提取缓冲液放入1.5 mL的离心管中。

   2.用无菌枪头挑取长度1~2 mm的酵母菌悬浮在装有缓冲液的离心管中。

   3.在95 °C的水浴锅或者金属浴中煮5 min-10 min。

   4.冰上放置2 min,常温条件下12,000 rpm,离心5 min,吸取上清移至新的离心管。得到的质粒可用于PCR分析。

二、PCR扩增目的条带。

   建议每10 μL PCR反应体系加入1 μL提取的酵母质粒,40个PCR循环数。

PCR反应体系:

试剂

20 μl反应体系

终浓度

2×PCR MasterMix

10 μl

Primer F, 10 µM

0.5 μl

0.25 μM

Primer R, 10 µM

0.5 μl

0.25 μM

Template DNA

2 μl

<1 μg/reaction

dd H2O

up to 20 μl

-

PCR反应条件:

2×Taq MasterMix

反应温度

反应条件

循环

94 ℃

6 min

1

94 ℃

30 sec

40

TM ℃

30 sec

72 ℃

1 kb/min

72 ℃

7 min

1

4 ℃

+∞

1

注意事项:

   1.建议提取酵母质粒前先把酵母克隆在平板上划1 cm左右的短线,生长2-3天后,挑取1~2 mm的酵母菌用做质粒提取。

   2.可根据酵母菌的多少适当增加或减少酵母质粒提取缓冲液的使用量。

   3.未使用的酵母质粒建议放在4 °C冰箱保存。

   4.如PCR结果不是很理想,建议将质粒梯度稀释作模板。

   5.在水浴之后放-80℃或-20℃冷冻后重复水浴一次,再离心取上清也会提高PCR产率。PCR反应体系可以比例扩大,但模板体积不应超过总体系体积的1/10。


我的购物车 (0)