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产品分类

中文名:Super酵母转化试剂盒II

英文名:Super Yeast Transformation Kit II

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:2-8℃

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产品编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SK2402-200T200T15981598
产品简介

产品内容:

Components

SK2402-200

Y1溶液(制备液)

100ml

Y2溶液(冻存液)

10ml

Y3溶液(转化液)

100ml

YPD Plus

100ml

说明书

1份

 产品说明:

    Coolaber的超级酵母转化试剂盒II型可以完成酵母感受态制备,酵母感受态储存,酵母转化实验。最突出的优点是能储存酵母感受态细胞,可长达一年。后续酵母转化操作简单而快速,转化效率与常规的酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用Coolaber的YPD Plus(Cat:YT0004),转化后复苏酵母菌,转化效率可以增加50-100%。

(一)酵母感受态细胞的制备:

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基上划线,在30℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。

3.首先把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30-50 mL液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1,000 g,离心5 min, 去上清。

注意:可用4℃一周内的的酵母菌培养产物3mL接种50mL YPDA培养基过夜培养后,离心收集细胞,用于下游实验。此步可以节约菌种活化,小摇所需的时间。

5.用10 mL的Y1溶液 悬浮、洗涤沉淀,1,000 g,离心5 min,去上清。

6.沉淀中加入0.5-1 mL的Y2溶液悬浮,既获得酵母感受态细胞。按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管(可直接用于转化)。

7.  将感受态缓慢冷冻后置于-80℃冰箱保存。建议将感受态细胞放入程序降温盒,或者几层纸包好放入泡沫盒中,再放于-80℃冰箱过夜,后将感受态取出置于-80℃保存。保存一年基本不影响其转化效率。使用时,-80℃冰箱取出,室温融化后直接用于转化,操作流程见(二)酵母转化。

注意:缓慢冻存感受态,是保证冻存后的感受态细胞转化效率的关键步骤。

(二)酵母转化:

1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μL的预混液。

Y3溶液

350 μL

质粒(大约200 ng/μl)

5 μL(根据质粒的浓度加入相应的体积)

总体积

360 μL不足体积用ddH2O补充

2.吸取360 μL的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞完全悬浮在预混液中。

3.放置在30 ℃的水浴锅中热激45-60 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3个小时。

4.3,000 g 离心3 min。

5.弃掉上清,用0.5 mL YPD Plus重新悬浮,30℃摇床震荡培养30-60 min。

6.1,000 g 离心5 min,弃掉上清。沉淀中加入1 mL无菌水或0.9%NaCl重悬菌体。

7.分别稀释10倍,100倍后涂布于相应的缺陷型培养基上。

8.30℃恒温培养3-5天直至平板出现酵母克隆。

注意事项:

1.  转化全程要无菌操作,YPD Plus开封后易染菌,需-20℃冻存。

2.  为了保证转化效率,感受态不宜直接用液氮冻存。

3.  增加酵母质粒的质量可以提高转化效率。




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